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發布時間:2019-12-14 閱讀281次
一、實驗材料:葉綠素廠廢液、石油醚、層析用氧化鋁、丙酮、乙醇、環己烷。
二、實驗器材:臺式離心機、離心管、天平、灰化爐、玻璃棒、玻璃層析柱、分液漏斗、紫外可見光分光光度計。
三、實驗內容:
1.廢液的預處理:取葉綠素廠廢液5mL于臺式離心機離心管中,置于臺式離心機中,進行平衡操作后,1000 r/min離心15min。取上層黃色液體于50ml梨形分液漏斗中。加25ml石油醚(沸程為30一60℃),充分混勻。
2.氧化鋁層析柱的準備:取100g氧化鋁于灰化爐中加熱至400℃,保持3h,使水分完全蒸發成活性氧化鋁。此時的氧化鋁為Ⅰ級,適當吸收空氣中的水分(約3%)后,成Ⅱ級,然后,用石油醚將活性氧化鋁調制成糊狀,備用。另取1支20 mm×300 mm的玻璃層析柱,關閉閥門,加入三分之一體積的石油醚、再將糊狀的話性氧化鋁慢慢地加入到玻璃層析柱中,同時打開層析柱的閥門,讓中中的石油醚慢慢地流出,有利于氧化鋁的沉降。當氧化鋁裝至層析柱的8D%時,停止加氧化鋁,待氧化鋁完全沉降。
3.加樣層析和洗脫:裝好層析柱,同時打開層析柱的閥門和分液漏斗的閥門,使分液漏斗中的樣品慢慢地加入到氧化鋁層析柱中。觀察氧化鋁由于加入樣品后顏色的變化。當前沿的顏色伸展至柱高度的二分之一時,關閉分液漏斗和層析柱的閥門,停止加樣。另取1個250mL分液漏斗,內裝石油醚:丙酮=9:l的混合溶液作為洗脫劑,安裝好層析裝置,分別打開分液漏斗和層析柱的閥門,讓洗脫劑慢慢流經層析柱。當顏色前沿到達層祈柱底部時,注意觀察并記錄色帶的分離情況。第一條帶(從底部往上數),是α-胡蘿卜素,第二條帶是β-胡蘿卜素,第三條帶是γ—胡蘿卜素,再往上是其他類胡蘿卜素及其他色素。本實驗要求收集β-胡蘿卜素組分。用50mL燒杯收集β-胡蘿卜素洗脫液。
4.沉淀:將洗脫液于50℃水浴中加熱使溶劑揮發.然后,在殘留物中加氯仿使之溶解后再用乙醇沉淀,如發現有白色沉淀物質產生,需用臺式離心機,控制轉速在2000r/min狀態下進行離心將其去除。在上清液中再加乙醇,得到的棕褐色沉淀,即為β-胡蘿卜素。稱量,記錄總重量。
關鍵詞:臺式離心機
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